Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8







^ Глава 2 Выбор и обоснование рационального варианта направления исследования


2.1 Апоптоз при вирусных парентеральных гепатитах

Вирусные гепатиты (ВГ) являются одной из важных медико-социальных заморочек в современном мире. По данным ВОЗ вирусным гепатитом В инфицировано около Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 2 миллиардов. человек. Вирусный гепатит С (ВГС) обширно распространён в разных странах мира. Сейчас уже понятно о существовании 500 -700 млн. человек – носителей HCV (10% всей популяции населения земли); около 70% всех погибших от приобретенных болезней печени Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 приходится на долю ВГС [И.В. Волчек с соавт. 2003; Ю.В. Лобзин и соавт., 2003].

В Рф эпидемиологическая ситуация по вирусным гепатитам и в прошедшем и в реальном остаётся неблагополучной. Сохраняется большой Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 массив нездоровых приобретенным ВГВ и носителей НВ – вируса, являющихся основными источниками HBV – инфекции. Количество носителей HBsAg в нашей стране превосходит 5 млн. человек [Ю.В. Лобзин и соавт. 2003; И.В. Шахгильдян и соавт Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. 2005].

В структуре заболеваемости вирусными гепатитами в последние годы непреклонно растёт толика гепатита С. Особенностью ХГС является долгий период бессимптомного течения, что затрудняет своевременную диагностику заболевания и осложняет эпидемиологическую ситуацию.

В связи с Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 широким распространением этих болезней, ростом заболеваемости, в особенности посреди лиц юного возраста, деток и подростков, тяжести исходов в виде цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы и недостаточно действенным исцелением в текущее время Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 ведется насыщенное исследование препядствия вирусных гепатитов [А.А. Баранов, Б.С. Каганов, В.Ф. Учайкин и соавт. 2004; А.Р. Рейзис и соавт. 2006 г; М.М. Котович 2003]. По современным мнениям, в патогенезе, развитии и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 течении вирусных гепатитов особенное место занимает апоптоз (программированная погибель клеточки) [Е.В. Дмитриева 2003; А.Н. Маянский 2005; C.B. Thompson 1995; D.W. Banner et al. 1993]. Апоптоз считают филогенетически более новым видом клеточной Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 погибели, эволюционировавшим как механизм антивирусной защиты. Больше исследовательских работ посвящается выяснению роли апоптоза при разных патологических состояниях, в том числе при вирусных гепатитах [T. Nasir et al 2002; N. Hayashi et al 1997]

Длительное время основной Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 формой смерти клеток печени при разных заболеваниях числился некроз. Открытие апоптоза стимулировало исследование роли этого явления в патологии печени, в итоге чего было найдено, что апоптоз может играть важную роль Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 в развитии острых и приобретенных вирусных гепатитов [T. Patel et al 1999; C. Rust, G.J. Gores 2000].

Обычная клеточка печени имеет программку пролиферации, обусловливающую её размножение, и программку апоптоза. Судьба клеточки, а означает, органа и организма Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 в целом, в большой мере зависят от того, в каком содействии работают эти программки [Е.В. Дмитриева, 2003 г.]. Но если механизмы пролиферации сравнимо отлично исследованы, то регуляция апоптоза исследована Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 недостаточно.

При вирусных гепатитах конфигурации касаются не только лишь клеток печени, главной мишени апоптоза, да и иммунокомпетентных клеток крови, а именно, лимфоцитов [G.Y.Chen et al 2005]. Репликация вируса в гепатоцитах и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 клеточках крови приводит к нарушению клеточного метаболизма, усилению перекисного окисления липидов, увеличению проницаемости клеточных мембран, повреждению лизосом, нарушению энергетического обмена и структуры ДНК (однонитевые разрывы с образованием маленьких фрагментов) [Н.Н. Белушкина 2005; S Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8.Nagata 2000]. Перечисленные выше признаки клеточных конфигураций являются признаками усиленного апоптоза.

Как при любом заразном процессе, в патогенезе вирусных гепатитов большущее значение имеет иммунный ответ организма. Если при гепатите А происходит адекватное ликвидирование Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 инфицированных гепатоцитов, в связи с чем процесс не перебегает в приобретенный, то при вирусных гепатитах В и С поражение печеночной клеточки иммуноопосредованно, что вместе с апоптозом обусловливает наклонность этих гепатитов к приобретенному течению Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. В этой связи приобретает особенное значение исследование апоптоза в иммунокомпетентных клеточках [T.H. Griffith et al 1995; В.П. Лесков и соавт. 1997; D. Klintman et al 2004].

В последние годы делаются пробы медикаментозного Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 воздействия на апоптоз, что могло быповлиять на нрав течения вирусных гепатитов [P. Botarelli et al. 1993; R. Sacco et al. 2003].

Четкие механизмы повреждающего деяния при HCV-инфекции неопознаны. Персистенция вируса ГС имеет Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 соответствующие черты - долгое латентное течение с закономерным бурным прогрессированием патологического процесса и смертельным финалом в конце, обычно, через много лет после первичного инфицирования. За эти характеристики вирус ГС получил заглавие «ласковый убийца Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8» [Соринсон С.Н. 1997]. Установлено, что вирус ГС не имеет интегративных форм, потому что в его актуальном цикле нет ни матричной, ни промежной ДНК. Анализ специфичных популяций Т-клеток дает основание полагать иммунологическую опосредованность Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 повреждения печени, зависящую от особенностей развития инфекции (неспешная репликация, мутирование вируса). Вирус ГС отличается высочайшей степенью изменчивости с образованием мутантных штаммов, которые и обеспечивают долгое персистирование вируса методом его "ускользания" от Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 иммунного ответа [Соринсон С.Н. 1997; Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. 2000]. Еще одним механизмом вирусной персистенции при ВГС, как и при ВГВ, может быть способность возбудителей к внепеченочной репликации, а именно, в циркулирующих макрофагах Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8-моноцитах. В данном случае вирусы становятся недостижимыми для иммунного контроля. Персистенция вирусов в организме является важным звеном патогенеза приобретенных вирусных гепатитов. В согласовании с современными представлениями ИЛ-1β, ФНО-α и ИФН-γ относятся к группе Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 провоспалительных цитокинов, индуцирующих и стимулирующих воспаление методом активации клеточно-опосредованного иммунитета с одной стороны, и ИЛ-4 - один из антивосполительных цитокинов, ограничивающих воспаление, но активирующих гуморальный иммунитет, с другой стороны. ИЛ Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8-1β эндогенный на биологическом уровне активный медиатор неспецифического деяния, один из первых врубается в ответную защитную реакцию организма при вирусной инфекции. ИЛ-1β активирует Т- и В-лимоциты, увеличивает их цитотоксические характеристики, инициирует синтез ФНО Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8-α и других цитокинов [Кетлинский С.А., Калинина Н.М. 1995]. ФНО-α - функциональный цитокин с выраженной плейотропностью, играет главную роль в развитии местных и общих, системных патологических процессов. Подтверждена его роль в регуляции интенсивности Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 воспаления, иммунного ответа, активации Т- и В-лимфоцитов, естественных клеток-киллеров, также в осуществлении гепатотоксических эффектов, в том числе методом активации апоптоза покоробленных (в том числе вирусами) клеток [Козлов В.А Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. 2000; Сек Ок Сун, Шапиро И.Я. 2002]. Понятно, что функциональное состояние иммунной системы организма играет огромную роль в развитии заразного процесса, который в свою очередь действует угнетающе на иммунную систему организма, нарушая регуляцию Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 иммунных реакций [Орреnheim J., Feldmen M. 2000]. Нефункциональность иммунитета имеет огромное значение в патогенезе заразных болезней и это в особенности касается системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ), играющих важную роль в поддержании гомеостаза организма. Данная система Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 представлена синусоидными, либо непаренхиматозными, клеточками, а конкретно - эндотелиальными клеточками синусоидов, звездчатыми клеточками Ито и купферовскими клеточками печени [Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000; Фрейдлин И.С. 1999]. Синусоидные клеточки являются основой воспалительных Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 реакций, которые реализуются методом выработки этими клеточками цитокинов. Мишенью "цитокиновой атаки" служат в большей степени гепатоциты, которые также экспрессируют провоспалительные цитокины [Фрейдлин И.С. 1999; Орреnheim J., Feldmen M. 2000].

Исследование патогенеза поражения печени при инфекции Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 вирусом гепатита В показало, что этот вирус сам по для себя не является цитотоксическим. Лизис инфицированных гепатоцитов, элиминация вируса и финал острого вирусного гепатита В зависят от иммунного ответа владельца Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8, при всем этом критически принципиальной в детерминировании течения и исходов HBV- инфекции является система эндогенного интерферона [Апросина З.Г. 1997].

При остром вирусном гепатите В активная репликация вируса приводит к синтезу всех Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 вирусных белков. Главным вирусным антигеном-мишенью является HBcAg. В процессе репликации он концентрируется на поверхности гепатоцитов, провоцирует завышенную продукцию эндогенного интерферона, что ведет к скоплению цитотоксических Т-клеток, ЕК, К-киллеров. При подходящем Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 течении острого вирусного гепатита В иммунная система обеспечивает элиминацию инфицированных клеток еще до того, как произошла окончательная интеграция вирусного генома в клеточный. Виремия и присутствие в печени вирусных антигенов (HBeAg, пpe-S Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8, HBcAg) краткосрочны. Немаловажное значение в элиминации вируса имеют провоспалительные цитокины ФНО-а и ИЛ-1в, продуцируемые макрофагами [Guidotti L.G. 1996]. Конкретно био цикл развития вируса гепатита В определяет нрав и силу иммунного ответа Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 макроорганизма и является ответственным за формирование клинических вариантов вирусной инфекции: латентное течение; острый, приобретенный гепатит; цирроз; гепатоцеллюлярный рак печени [А.Г. Рахманова, Т.П. Демиденко, Н.И. Кузнецов, Е.В. Степанова Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 1998].

Почти всегда приобретенного поражения печени, в том числе при инфекции гепатотропными вирусами, главным механизмом смерти клеток служит апоптоз. За много лет до открытия апоптоза был описан соответствующий гистологический признак вирусного гепатита - округленные Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 гомогенные эозинофильные образования, нередко содержащие пикнотичное ядро. Эти образования, нареченные тельцами Каунсильмена, представляют собой не что другое, как гепатоциты в состоянии апоптоза [Аруин Л.И. 1998].

Апоптозу принадлежит важная роль в регуляции как Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 физиологических, так и патологических процессов [Аббасова С.Г. с соав. 1999; Аруин Л.И. 1998; Hayashi N., Mita E., 1997; Kawahara H. еt al. 1994]. И угнетение, и неадекватное усиление апоптоза ведет к патологическим изменениям органов и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 тканей. В то время как лишная активация апоптоза, наблюдаемая, а именно, при инфицировании клеток печени гепатотропными вирусами, обусловливает разрушение печеночной ткани, ослабление апоптотической смерти клеток (вызванное, например, мутацией гена, кодирующего проапоптогенный белок Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 р53) служит одним из ведущих причин канцерогенеза.

Недостающая изученность многих качеств патогенеза приобретенных вирусных гепатитов, в особенности приобретенного гепатита С (ХГС) почти во всем сказывается на решении таких важных мед Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 задач, как создание вакцины, определение прогноза естественного течения заболевания, преждевременное прогнозирование фуррора антивирусной терапиии, в конце концов, разработка новых препаратов этиотропного и патогенетического деяния. Установлено, что вирус гепатита С (HCV) обусловливает в большей степени Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 иммуноопосредованное повреждение клеток печени, формирование воспалительного инфильтрата и фибротические конфигурации печени, ведущие у 20% пациентов к развитию цирроза. По современным представлениям, посреди устройств повреждения гепатоцитов при ХГС значимая роль отводится апоптозу [Bantel H Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. et al. 2001; Kountouras J. et al. 2003]. Апоптоз представляет собой основной путь поражения инфицированных вирусом клеток цитотоксическими Т-лимфоцитами (ЦТЛ). В ЦТЛ-опосредованном апоптозе можно выделить 5 главных шагов: 1) определение антигена на поверхности клетки Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8-мишени ЦТЛ и его конъюгация с клеткой-мишенью; 2) активация ЦТЛ; 3) пуск апоптоза с помощью комплекса Fas/FasL или гранзим-перфоринового пути; 4) отсоединение ЦТЛ; 5) смерть клетки-мишени методом осмотического лизиса и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 апоптоза.

Передача апоптотического сигнала осуществляется средством каскадной активации каспаз (относятся к семейству протеаз), подобно каскаду реакций коагуляции, и приводит к расщеплению клеточных структур. ЦТЛ-опосредованный апоптоз инициируется активацией «рецепторов смерти», которые запускают Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 механизм клеточной смерти средством каспазного каскада. Сначала активизируются каспазы 8 и 10, на последующих шагах – каспазы 3, 6 и 9, обозначающиеся как эффекторные ввиду их конкретного роли в ликвидировании клеточки. Установлено наличие 2-ух путей активации эффекторных каспаз –наружного и внутреннего Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. 1-ый, к которому относится ЦТЛ-опосредованный апоптоз, обоснован активацией «рецепторов смерти», 2-ой – нефункциональностью митохондрий [Cohen G.M. 1997; Rust C., Gores G.J. 2000].

Выявлены восемь рецепторов, вовлеченных во наружный путь, из которых Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 более исследован сенсор фактора некроза опухоли-α 1-го типа (TNF-R1) и сенсор Fas (CD95/APO-1). Fas, он же APO-1 либо CD95, относится к мембранным белкам I типа (молекулярная масса от Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 42 до 50 кДа, 325 аминокислот). Взаимодействие TNF-α и Fas с надлежащими сенсорами ведет к активации каспазы 8, которая содержит N-конец Fas-ассоциированного белка с доменом погибели (FADD) и производит связь рецепторов с эффекторными каспзами (Аббасова Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 С.Г. с соавт.,2000). 2-ой путь апоптоза запускается высвобождением цитохрома C из митохондрий. В цитоплазме цитохром С связывается с белком Apaf-1, формируя комплекс, который связывается с каспазой 9 и инициирует ее активацию. В предстоящем 2-ой Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 путь повторяет 1-ый, потому что каспаза 9 активирует эффекторные каспазы, как было описано ранее [Rust C., Gores G.J. 2000)].

Апоптозу принадлежит главная роль в регуляции лимфоцитарного пула на стадиях созревания и активации Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. Выраженность экспрессии генов B-клеточной лимфомы/лейкемии-2 (Bcl-2) либо Bcl-xL находится в оборотной корреляционной зависимости с чувствительностью клеток к апоптозу. Усиленная экпрессия Bcl-2 либо Bcl-xL приводит к повышению длительности Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 жизни созревающих лимфоцитов и усилению иммунного

ответа. Напротив, понижение экспрессии этих генов ведет к сокращению жизни как созревающих, так и зрелых лимфоцитов. В отличие от Bcl-2 и Bcl-xL усиление экспрессии белка Bax Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 активирует апоптоз.

Результаты иммуногистохимических исследовательских работ проявили, что на поверхности Т-лимфоцитов, формирующих воспалительный инфильтрат в печени при ХГС, увеличена экспрессия Fas-лиганда (FasL). Секретируемый FasL, высвобождаемый из активированных Т-лимфоцитов Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8, может служить апоптотическим сигналом для гепатоцитов, несущих на собственной поверхности Fas-рецептор.

У нездоровых ХГС выявлено усиление Fas-опосредованного апоптоза гепатоцитов, при всем этом экспрессия FasL наращивается параллельно прогрессиро-ванию заболевания [Faubion W.A., Gores Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 G.J., 1999]. Лимфоциты, инфильтрирующие печень, распознают присутствие вирусных антигенов на гепатоцитах, активизируются и экспрессируют FasL на собственной поверхности. С другой стороны, инфицированные гепатоциты усиливают экспрессию рецепторов Fas и увеличивают чувствительность к Fas Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8-опосредованномуапоптозу [Faubion W.A., Gores G.J., 1999; Su F., Schneider R.J., 1997). Активация иммуноопосредованного апоптоза при ХГС подтверждается, не считая того, данными о повышении уровня перфорина/гранзима В у пациентов с Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 циррозом печени в финале ХГС в отличие от цирроза, вызванного невоспалительными болезнями, также в отсутствие поражения печени [Kountouras J., Chatzopoulos D., Zavos 2003]. В периферической крови спонтанный апоптоз Т-лимфоцитов у пациентов, инфицированных HCV Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8, также существенно повышен относительно здоровых лиц [Toubi E., Kessel A., Goldstein L. et al. 2001].

Core-протеин HCV, хотя и является структурным компонентом вируса, может делать регуляторную функцию, усиливая либо ингибируя Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 апоптоз. В ряде исследовательских работ установлено, что этот белок делает как проапоптогенную, так и антиапоптогенную роль зависимо от экспериментальных критерий и типа применяемых клеток, в то время как белки NS3 и NS Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 85А проявляют только антиапоптотический эффект [Calabrese F., Pontiso P., Perrenazzo E. et al. 2000]. Модуляция апоптоза может включать в себя внутриклеточное связывание core-протеина с сенсорами TNF, Fas либо лимфотоксина β либо замещение со

бой сигнальных Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 молекул, таких как TNF-рецептор-ассоциированный фактор-2 (TRAF-2) либо TNF-рецептор-ассоциированный домен погибели (TRADD). Было подтверждено, что core-протеин может ингибировать либо активировать транскрипционный фактор NFkB, также модулировать чувствительность Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 гепатоцита к действию цитокинов. При всем этом одни создатели отметили усиление таковой чувствительности, а другие – ее понижение либо отсутствие существенных конфигураций [Bantel H., Lugering A., Poremba С. et al. 2001]. Не считая того, свежие Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 исследования проявили, что core-протеин ведет взаимодействие in vitro и ингибирует РНК-зависимую протеинкиназу (PKR), которая также вовлечена в процесс апоптоза. Таким макаром, белок HCV может модулировать апоптоз гепатоцитов с помощью Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 прямых и непрямых устройств.

Принятая в текущее время концепция устройств иммунного ответа также указывает, что секреция таких цитокинов, как интерферон-γ (IFN-γ), TNF-α и интерлейкин-12 (IL-12) ведет к активации Т-хелперов 1-го типа, которые Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 производят антивирусное действие (Th1-ответ). С другой стороны, секреция IL-10 обеспечивает стимуляцию гуморального звена иммунитета (Th2-ответ), что, может быть, играет определенную роль в регуляции апоптотических процессов [Fan X.G., Liu W.E Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8., Li C.Z. et al. 1998].

Как отмечалось ранее, наружный путь апоптоза начинается с лиганд-рецепторного взаимодействия. Представление о функционировании рецепто-

ров клеточной смерти служит теоретической базой для разработки хорошей стратегии Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 патогенетического исцеления разных болезней, в том числе вирусных гепатитов. Данные литературы свидетельствуют, что при вирусном гепатите апоптоз может быть как результатом прямого воздействия вируса, так и опосредован иммунной реакцией. Пуск процессов апоптоза при Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 проникновении в гепатоцит вируса следует рассматривать как собственного рода защитный механизм, так как в мертвой клеточке репликация вируса становится неосуществимой. Потому «в интересах» вируса – подавить апоптоз и сохранить клеточки жизнестойкими. И вправду, некие Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 кодируемые вирусами белки владеют антиапоптозной активностью, которая осуществляется угнетением функции проапоптогенного (и противоопухолевого) белка р53, инактивацией каспаз, также усиленной экспрессией массивного ингибитора апоптоза Bcl-2 [Hayashi N., Mita E., 1997; Sprinzl M.F., Rosset Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 S., Male F.-F. et al. 2005]. Любопытно, что в норме Bcl-2 найден в печени исключительно в эпителии желчных протоков, повсевременно контактирующих с желчью, но не в гепатоцитах [Аруин Л.И Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. 1997].

О связи экспрессии Fas и следующего апоптоза с действием вируса гепатита С свидетельствует и то, что после удачного исцеления α-интерфероном количество Fas-положительных клеток резко миниатюризируется и коррелирует как со понижением активности трансаминаз, так и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 с уменьшением выраженности портальной и лобулярной лимфоидной инфильтрации ткани печени [Toubi E., Kessel A., Goldstein L. et al. 2001].

Результаты исследовательских работ А.О. Буеверова и А.Е. Грязина (2006) указывают на значимые Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 различия в реализации устройств поражения инфицированных вирусом гепатоцитов при приобретенных гепатитах В и С. При ХГС степень экспрессии Fas и FasL лимфоцитами воспалительного инфильтрата достоверно превосходила таковую при ХГВ: 2,3±0,2 по сопоставлению с Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 0,9±0,2 для Fas и 2,5±0,2 по сопоставлению с 1,1±0,3 для FasL соответственно. Средний индекс TUNEL-положительных гепатоцитов, т. е. гепатоцитов в состоянии апоптоза, в биоптатах печени составил 32±7,1%, что достоверно превосходит количество таких при ХГВ (7,6±4,3%, р=0,01) и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 коррелирует с уровнем экспрессии FasL клеточками лимфоидного инфильтрата [Е.В. Дмитриева и соавт. 2003].

Приобретенные данные подтверждают ведомую роль клеточного Fas-опосредованного иммунного ответа организма на антигены вирусов гепатитов В Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 и С в повреждении гепатоцитов. Найдено, что при ХГВ даже широкий воспалительный инфильтрат содержит не много лимфоцитов, экспрессирующих FasL, потому ЦТЛ фактически «безоружны» в окружении инфицированных вирусом клеток. При ХГС активированные Т Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8-лимфоциты владеют массивным цитотоксическим потенциалом в виде высочайшего уровня экспрессии FasL для поражения инфицированных гепатоцитов, экспрессирующих белок Fas. Принципных различий в степени экспрессии Fas гепатоцитами у нездоровых обеих групп выявлено не было Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 (А.О. Буеверов). Принципиально выделить, что при приобретенных вирусных гепатитах сами лимфоциты становятся объектом цитотоксического деяния собственного FasL либо FasL гепатоцитов. Это подтверждается как экспрессией FasL на гепатоцитах, так и экспрессией Fas на Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 ЦТЛ, достоверно более высочайшей при ХГС по сопоставлению с ХГВ [Е.В. Дмитриева и соавт. 2003].

Экспрессия Fas-R на мембране гепатоцитов индуцируется рядом провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкины (ИЛ-1, -2, -6), интерфероны (ИФН-γ), причины некроза Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 опухоли (TNF-α) и др. Таким макаром, возможно, что воспаление хоть какой природы может содействовать Fas-R-зависимому повреждению печени. Более того, цитокины стимулируют повышение количества молекул Fas-L на Т Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8- и NK-лимфоцитах. Внутриклеточный домен TNF-R1 также активно экспрессируется на гепатоцитах и клеточках Купфера. Его экспрессия резко увеличивается при гепатите хоть какой этиологии (вирусный, спиртной, аутоиммунный и др.). Исследования F. Su и соавторов Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 [1997] показали, что НВх-протеин вируса гепатита В сенсибилизирует культуру гепатоцитов к TNF-α-индуцированной цитотоксичности. Персистенция HBsAg также сенсибилизирует гепатоцит к TNF-опосредованному апоптозу.

Следует увидеть, что даже в здоровой печени NK Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8- и CD8+-T-лимфoциты печеночных синусоидов содержат больше мРНК ИЛ-15, -18, TNF-α, ИФН-γ по сопоставлению с периферическими клеточками, что свидетельствует о завышенной готовности к осуществлению апоптоза гепатоцитов в случае появления их конфигураций, к Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 примеру, при инфицировании вирусом [Jonsson J.R., Edwards-Smith C.J., Catania S.C. et al. 2000].

О связи экспрессии Fas и следующего апоптоза с действием вируса гепатита С свидетельствует и то, что после удачного Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 исцеления а-интерфероном количество Fas-положительных клеток резко миниатюризируется и коррелирует как со понижением активности трансаминаз, так и с уменьшением выраженности портальной и лобулярной лимфоидной инфильтрации ткани печени [Okazaki Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 M., Hino K., Fujii К et al. 1996]. В конце концов, продуцируемый в большей степени макрофагами в лишних количествах TNF-α также ведет к апоптозу клеток методом взаимодействия с подходящим сенсором.

Имеющиеся данные о Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 роли апоптоза при появлении острых гепатитов очень небогаты. Найдено увеличение экспрессии Fas белка в гепатоцитах у 3-х пациентов с фульминантной формой печеночной дефицитности, обусловленной вирусной (гепатит В) заразой [Rivero V., Grespo J., Casafront F Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8. 1998]. Большая часть выживших печеночных клеток оказались TUNEL-положительными, что свидетельствует о вовлечении Fas-медиированного апоптоза в патологический процесс при острых гепатитах [Rivero V., Grespo J., Casafront F. 1998].

Терапевтическое воздействие на систему Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 АРО-1\Fas, по-видимому, можно достигнуть методом инактивации антигенами рецепторов АРО-1\Fas либо их лигандов [Galle P.R., Hofmann W.I., Walczak H. et al., 1995, Hiramatsu N., Hayashi N., Katayama K. et Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 al. 1994]. Но появляется неувязка направленной доставки антител в печень, чтоб избежать их повреждающего деяния на обычные органы и ткани [Hiramatsu N., Hayashi N., Katayama K. et al. 1994].

Являясь универсальным биологическим механизмом, апоптоз Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 при вирусных гепатитах может приводить к лишней смерти не только лишь гепатоцитов, да и других клеточных популяций, отражая или системный иммуновоспалительный ответ на заразу, или внепеченочную персистенцию вируса. В связи с этим определенный Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 энтузиазм представляют исследования А.О. Бееверова и А.Е. Грязина (2006) апоптоза периферических лейкоцитов при приобретенном гепатите. У нездоровых приобретенными гепатитами В и С и у здоровых доноров определялось количество лимфоцитов Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 и гранулоцитов периферической крови в состоянии апоптоза конкретно после выделения и после 24-часовой инкубации в культуральной среде способом проточной цитофлюориметрии, также повреждение ДНК по скорости щелочной денатурации. Даннные исследования проявили, что апоптоз как Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 лимфоцитов, так и гранулоцитов был достоверно выше у нездоровых ХГВ по сопоставлению с контролем как конкретно после выделения, так и после дневной инкубации. Более насыщенный переход клеток в апоптоз наблюдался в подгруппе нездоровых гепатитом Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 С, хотя тут следует учесть роль различного количества пациентов в подгруппах (12 с гепатитом В, 22 с гепатитом С). Выявлена также корреляция меж степенью повреждения ДНК лимфоцитов и гранулоцитов и скоплением клеток в Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 состоянии апоптоза после инкубации [Буеверов А.О., Тихонина Е.В., Москалева Е.Ю. и др. 2000]. Кроме этого, после дневной инкубации количество лейкоцитов обеих популяций в апоптозе достоверно коррелировало с сывороточной концентрацией TNF-α [Boueverov Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 A.O., Mammaev S.N., Tikhonina E.V. et al. 2000].

Приобретенные результаты свидетельствуют об усилении программированной смерти клеток периферической крови у нездоровых приобретенным вирусным гепатитом, что может отражать как повреждающее действие Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 гепатотропных вирусов на лейкоциты (либо их костномозговые предшественники), так и воздействие системного деяния провоспалительных цитокинов. Косвенным доказательством последнего механизма служит корреляция интенсивности апоптоза с сывороточным уровнем TNF-α - более массивного цитокина с Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 проапоптогенным эффектом.

В связи с этим, определенный энтузиазм представляют исследования устройств, ведущих к апоптозу клеток печени при приобретенном вирусных гепатитах В и С. Диагностическая значимость оценки уровня цитокинов заключается в констатации самого Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 факта увеличения либо понижения уровня цитокинов у данных нездоровых с определенным болезнью, в определении связи этих конфигураций с течением заболевания, также в вероятном использовании сведений о цитокинах для оценки степени апоптоза и Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 эффективности проводимого исцеления. Невзирая на бессчетные исследования, остается открытым вопрос о том, может быть ли оценить степень активности воспаления и фиброгенеза в печени на основании определения сывороточных и местных концентраций цитокинов с разным диапазоном Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № - страница 8 деяния, что в итоге может содействовать разработке новых подходов к исцелению болезней печени.


otchet-o-vipolnenii-publichnoj-deklaracii-celej-i-zadach-glavnogo-upravleniya-mchs-rossii-po-smolenskoj-oblasti-na-2013-god-vo-ii-kvartale-2013-goda-stranica-3.html
otchet-o-vipolnenii-rabot-po-razrabotke-proektov-normativnih-pravovih-aktov-i-metodicheskih-rekomendacij-v-sfere-realizacii-meropriyatij-administrativnoj-reformi-lipeckoj-oblasti-gosudarstvennij-kontrakt-101-ot-14-12-2011-stranica-6.html
otchet-o-vipolnenii-raboti-predstavte-v-pechatnoj-ili-elektronnoj-forme.html